Efecto del adyuvante sobre la respuesta celular y humoral en cerdos vacunados frente a Mycoplasma hyopneumoniae

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Efecto del adyuvante sobre la respuesta celular y humoral en cerdos vacunados frente a Mycoplasma hyopneumoniae

06 April 2016

Investigación de B. Siklódi, M. Tenk, N. Terényi, I. Tóth, F. Misák, J. Herczeg, y B. Kadra1 de Ceva-Phylaxia, Budapest, Hungría, y J. Benyeda de Prophyl Ltd., Mohács, Hungría.

La protección frente a la infección por Mycoplasma hyopneumoniae (Mh) está mediada tanto por la respuesta humoral como por la respuesta celular del sistema inmunitario, aunque suele revestir mayor importancia el segundo tipo de respuesta. Por lo tanto, resulta fundamental para que la vacuna frente a Mh sea eficaz que logre inducir una respuesta celular en el cerdo además de desencadenar la producción de anticuerpos.

Los distintos adyuvantes pueden dirigir el sistema inmunitario hacia una respuesta de tipo Th1 (celular) o Th2 (producción de anticuerpos) que puede detectarse mediante análisis celulares o serológicos.

En este artículo, demostramos la importancia de optimizar el adyuvante utilizado presentando los resultados obtenidos en los análisis celulares y serológicos realizados con muestras de sangre extraídas de cerdos que recibieron vacunas experimentales frente a Mh. Las vacunas utilizadas en el estudio incluyeron un adyuvante optimizado y otro sin optimizar. La formulación optimizada es la que se emplea en la vacuna comercial Hyogen^®.

Materiales y métodos

Se vacunaron tres grupos de 10 lechones cada uno, seronegativos a Mh, mediante una única inyección a las tres semanas de vida (D21) con las formulaciones que se muestran en la tabla 1. El contenido antigénico de la vacuna del grupo 2 y del grupo 3 fue el mismo, mientras que el adyuvante utilizado incluyó una cantidad variable de lipopolisacáridos no tóxicos de la cepa J5 de E. coli en una emulsión de aceite en agua. El contenido oleoso de las formulaciones también fue diferente.

Tabla 1. Formulación de las vacunas

Se realizó una prueba de hipersensibilidad retardada (DTH) el día D40 en la mitad de los animales de cada grupo mediante una inyección intradérmica de antígeno purificado de Mh. Como control positivo se usó fitohemaglutinina (PHA). El grosor de la piel se midió con un calibrador digital sensible a la presión (Mitutoyo, Japón) una vez transcurridas 24 horas desde la inyección intradérmica.

Se tomaron muestras de sangre el día D40 de la otra mitad de los cerdos de cada grupo para determinar la concentración de interferón-γ (IFNγ) mediante un análisis ELISPOT y de anticuerpos mediante un análisis ELISA. Se utilizó un kit IFNγ ELISPOT (R&D, EE. UU.) y un lector ELISPOT (CTL, EE. UU.) para cuantificar la secreción de citoquinas específica de antígeno por parte de linfocitos T estimulados in vitro. Los títulos de anticuerpos frente a Mh se determinaron mediante un ELISA indirecto desarrollado en nuestro laboratorio.

Resultados

La Figura 1 muestra el efecto del adyuvante sobre la respuesta inmunitaria celular y humoral tras una única inyección.

Figura 1. Respuesta humoral y celular en los cerdos vacunados

Conclusiones

En este estudio demostramos el efecto de las diferentes formulaciones de las vacunas sobre la respuesta inmunitaria celular y los títulos de anticuerpos en suero de acuerdo con los resultados obtenidos en la prueba de hipersensibilidad retardada (DTH), el análisis ELISPOT (IFNγ) y el análisis ELISA (anticuerpos frente a Mh).

La formulación que incluía un adyuvante optimizado consistente en una emulsión de aceite en agua y la cantidad adecuada de lipopolisacáridos no tóxicos generó tras una única inyección una potente estimulación de la respuesta inmunitaria celular y humoral en lechones seronegativos.

(Hyogen^® es un producto de CEVA Santé Animale)

Bibliografía

1 - Sibila et al, Vet J. 2009 181:221-231

2 - Herczeg et al, APVS, 2011

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